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高效液相色谱仪 测定 食品着色剂 亿鑫仪器供
高效液相色谱仪 色谱仪应用 液相色谱仪方法
食品中着色剂高效液相色谱仪(HPLC)检测方案
1 仪器与试剂
1.1 仪器
梯度高效液相色谱仪,配紫外
色谱柱 C18 250mm×4.6mm×5μm
超声波水浴
分析天平(感量0.001g)
0.45μm水性滤膜
1.2 试剂
甲醇,色谱纯。
正己烷。
聚酰胺粉(尼龙6):过200目筛
磷酸,色谱纯。
柠檬酸溶液:称取20克柠檬酸,加水至100mL,溶解混匀。
乙酸铵溶液(0.02mol/L)称取1.54克乙酸铵,加水至1000mL,溶解,经经0.45μm水性滤膜过滤。
无水乙醇-氨水-水(7+2+1):量取无水乙醇70mL、氨水20mL、水10mL混匀。
合成着色剂标准液:准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各0.100克,置于100mL容量瓶中,加pH=6水到刻度,配成水溶液。
2 测定原理
食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液液分配法提取,制成水溶液,注入高效液相色谱仪,经反相色谱分离。
3 试样溶液的制备
称取试样5.000g-10.000g(精确至0.0001g),置于100ml烧杯中,加100ml水,用柠檬酸溶液调pH到6,加热至60度,将1克聚酰胺粉加少许水调成糊状,倒入试样溶液中,搅拌片刻,以G3垂融漏斗抽滤,用pH=4的水洗涤3-5次,然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3-5次,再用水洗至中性,用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3-5次,每次5mL,收集解吸液,加乙酸中和,蒸发至近干,加水溶解,定容至5mL。经0.45μm水性滤膜过滤,进高效液相色谱仪测定。
4 色谱条件
色谱柱:C18 250mm×4.6mm×5μm;
流动相:以20mmol乙酸铵为流动相A,以甲醇为流动相B,按下表规定经行梯度洗脱;
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B |
0 | 80 | 20 |
5 | 65 | 35 |
15 | 15 | 85 |
17 | 2 | 98 |
22 | 2 | 98 |
22.1 | 80 | 20 |
30 | 80 | 20 |
流速:1.0mL/min;
温度:室温;
进样量:20μL;
检测波长:254nm。
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